首先讓我們搞清楚銀屑病(牛皮癬)的發病機理:
銀屑病發病由制病因素(發病誘因),激活免疫T細胞(主要CD4+,CD8+)異常活化增值,並轉移至皮膚,CD4+,CD8+釋放細胞因子產生一系列的炎症反應,並導致血管增生,最終形成銀屑病患者諸多的病理症狀,例如:①形狀大小不一的紅斑,周圍有炎性紅暈;②群集性淺表的無菌性膿皰,部分可融合成膿湖;③全身皮膚瀰漫性潮紅、腫脹和脫屑;④關節紅腫疼痛等症狀。
醫院用到的技術:流式細胞技術
流式細胞術工作原理是在細胞分子水平上通過單克隆抗體對單個細胞或其他生物粒子進行多參數、快速的定量分析。它可以高速分析上萬個細胞,並能同時從一個細胞中測得多個參數,具有速度快、精度高、準確性好的優點,是當代最先進的細胞定量分析技術之一。
下面我們來看看怎麼讀圖?
FCM數據的存貯的方式是FCS2.0,採用列表排隊(List Mode)方式。易於加工處理分析,但缺乏直觀性,數據的顯示通常有一維直方圖、二維點圖、等高線圖、密度圖等幾種。
問題1:座標軸的意義?
1、 單參數直方圖
每一個細胞單參數的測量數據可以整理成統計分佈,以直方圖的方式來顯示。在圖中,橫座標表示熒光信號或散射光信號相對強度的值,其單位是道數(channel),可以是線形(line)或者對數(log)。縱座標一般是相對細胞/粒子數(count)!
2、 二維圖
在二維圖的中,橫座標/縱座標都表示熒光信號或散射光信號相對強度的值,可以是線形(line)或者對數(log)。雙參數圖可以將樣品細胞群分開,從而方便對感興趣的細胞進行分析。
FSC和SSC參數的意義
問題2:“Gate”和 “Regin”?
設門是流式細胞分析中一種重要的技術,只有通過最佳的設門方式,才能準確地獲取和分析數據,從而得到臨床診斷和科研中有價值的信息。
問題3:流式圖中的顏色與熒光顏色?
流式圖中的顏色為區分不同細胞群而人為指定, 與熒光顏色無關!!
如上圖所示,由於淋巴細胞、單核細胞和粒細胞的FSC和SSC的參數不同,因此,我們可以用這兩個參數將這些細胞區分開。這對於我們更進一步分析其亞群的比例和功能至關重要。
問題4:流式圖中的陰/陽(N/P)如何劃分?
如何做M1陰性界限?實際上,這個M1的劃分完全是根據陰性(同型)對照來的!
左圖:同型對照,即:您所檢測的物質在陰性組中的基礎表達量,可以理解為背景、靜息狀態下、基礎水平、未受刺激時等。
右圖:即陽性組,也就是接受刺激後,功能狀態下、藥物作用後等。
問題5: 這麼巧,陰性正好在101劃分??
其實, 我們可以人為地將電壓,放大倍數調到相應的大小,使陰性的右邊界在某一個值上,(通常劃在101附近)這樣後期做sample時好看!當然也可以調到102,103次方。
問題6:為什麼要進行熒光補償?
流式細胞分析中經常要用到2種以上的熒光標記抗體進行染色,而目前所使用的多種熒光染料發射譜間有一定重疊。
“熒光補償”這個術語是指修正熒光滲漏的過程,如從探測器除去除匹配熒光以外的任何熒光信號。
簡單來說,體表受累面積即BSA:相當於一個成年人手掌的面積。BAS˃10為重度,BAS˂3為輕度,在3和10之間為中度。我們可以根據BAS值來查看我們的嚴重程度。
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