測序結果驗證方法總有一種適合你

隨著測序技術的普及，科研工作者們獲得了大量的測序結果，隨之，如何驗證這些結果就成為困擾大家的一個難題了。今天小編為大家彙總了測序結果驗證的方法，相信總有一種適合你！趕快來看看吧~

Sanger測序

原理

每個反應含有四種dNTP和一種不同的ddNTP，由於ddNTP缺乏延伸所需的3-OH，使延長的寡聚核苷酸選擇性地在A、T、G或C處終止。通過變性凝膠電泳分離片段，從而獲得鹼基序列。

優勢

經濟、準確；

適用於變異位點集中、小樣本量驗證。

劣勢

通量小；

特殊區域，驗證成功率不高。

目標區域測序

原理

通過定製目標基因組區域探針，與基因組DNA進行雜交，將目標區域DNA富集後進行高通量測序。

優勢

測序區域集中，可批量驗證；

數據量小，性價比高；

可為已有分析結果做補充；

測序深度高，可檢測稀有變異。

劣勢

探針定製週期較長（約2個月）；

對樣本數量有要求，單個樣本/少量樣本/少量位點不適用。

微陣列比較基因組雜交（Array-CGH）

原理

使用不同的熒光染料，如Cy5（紅）和Cy3（綠）分別標記所比較的兩種樣品的基因組DNA序列，然後在Array-CGH芯片上進行競爭性雜交；通過比較兩種染料熒光信號強度，判斷染色體CNV。

優勢

批量驗證；

適用於樣本量少、位點多的項目驗證。

劣勢

芯片成本較高。

熒光原位雜交（FISH）

原理

利用熒光基團標記DNA探針，再將標記的DNA探針與樣本DNA進行原位雜交，最後在熒光顯微鏡下對熒光信號進行計數，檢測大片段染色體結構變異。

優勢

結果直觀；

適合樣本數較少，位點較少的驗證項目。

劣勢

分辨率較低，檢測靈敏度有限；

通量小；

實驗操作難度較大。

微滴式數字PCR

原理

微滴式數字PCR系統是在傳統的PCR擴增前對樣品進行微滴化處理，即將含有核酸分子的反應體系分成數萬個納米級的微滴；經PCR擴增後，對每個微滴的熒光信號進行逐一分析，有熒光信號的微滴判讀為1，沒有熒光信號的微滴判讀為0，根據泊松分佈原理及陽性微滴的個數與比例即可得出靶分子的起始拷貝數或濃度。

優勢

靈敏度高；

絕對定量；

適用於樣本量少，位點少的驗證項目。

劣勢

不能批量檢測；

需要設計Taqman探針；

需要摸索PCR條件。

看了小編的總結，愛學習的你是不是立馬有了新思路呢？